眾所周知，利用Taq酶抗體實(shí)現(xiàn)熱啟動PCR是抑制非特異性擴(kuò)增的重要手段。Taq酶抗體在低溫下（一般<50℃）能夠封閉Taq酶的活性，而在PCR反應(yīng)溫度下與Taq酶解離并釋放其活性，從而避免低溫時產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增。
現(xiàn)有熒光定量PCR試劑中，Taq酶抗體的成本占到總成本的60%以上。但是小伙伴們是否發(fā)現(xiàn)，從市場上購買的Taq酶抗體往往對自己的Taq酶封閉效果并不理想，這是什么原因呢？
免疫學(xué)上，抗原上與抗體結(jié)合的位點(diǎn)稱為抗原表位，往往只包含幾個氨基酸殘基。如果所使用的Taq酶是突變體，而突變位點(diǎn)恰好位于某個抗原表位上，那么針對野生型Taq酶篩選的抗體與這種突變體的親和力就有可能下降。
針對這種問題，愚公生物&百時美研發(fā)團(tuán)隊(duì)經(jīng)過長期努力，成功構(gòu)建了包含多種Taq酶抗體的抗體庫。與常規(guī)抗體庫相比，愚公抗體庫有三點(diǎn)顯著優(yōu)勢：
1. 可針對不同Taq酶突變體進(jìn)行封閉，組合使用可達(dá)到更優(yōu)效果；
2. 包含針對外切酶結(jié)構(gòu)域的抗體；
實(shí)際應(yīng)用中，已經(jīng)出現(xiàn)了針對不同需求（如提高擴(kuò)增速率、增強(qiáng)抑制劑耐受性等）的多種Taq酶突變體。愚公選取了公開發(fā)表文獻(xiàn)中的6種Taq酶突變體進(jìn)行測試，發(fā)現(xiàn)不同抗體對不同Taq酶突變體的親和力有顯著差異。
因此，愚公生物&百時美構(gòu)建了包含多種抗體的抗體庫，以滿足用戶對不同Taq酶突變體的需求。
我們在野生型Taq酶上發(fā)現(xiàn)了至少5個抗原表位，不同抗體對同一種Taq酶的結(jié)合表位也不盡相同。利用該性質(zhì)，組合使用不同抗體可達(dá)到最大的封閉效果。
針對野生型Taq酶，分別使用A3、A7、A3/A7混合抗體按照摩爾比抗體:Taq=2:1孵育得到熱啟動Taq酶，并測試其活性，結(jié)果如下圖：
熒光值越高表示Taq酶殘留活性越高。結(jié)果顯示40 U的熱啟動Taq酶活性＜0.2 U Taq，代表40 U Taq酶被封閉了超過39.8 U的活性，則封閉性＞39.8/40=99.5%。
在抗體與Taq酶摩爾比不變的情況下，使用A3/A7混合抗體對Taq酶的封閉效率遠(yuǎn)大于單獨(dú)的A3或A7抗體，在37℃下幾乎完全封閉了Taq酶活性。
愚公生物&百時美Taq酶抗體在正常PCR的95℃，30 s預(yù)變性過程中即可充分解封閉，且升溫過程中無非特異性擴(kuò)增，無需額外改變反應(yīng)程序。
Taq酶除具有DNA聚合酶結(jié)構(gòu)域外，還具有5’-3’外切酶結(jié)構(gòu)域。在Taqman探針法檢測中。如果僅封閉聚合酶結(jié)構(gòu)域，外切酶結(jié)構(gòu)域仍可能降解一部分探針，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
我們經(jīng)過潛心篩選，獲得了能夠高效封閉Taq酶外切酶活性的單克隆抗體，測試結(jié)果如下：
三、生產(chǎn)工藝先進(jìn)，質(zhì)量穩(wěn)定可靠
? 純度高
經(jīng)SEC-HPLC檢測，抗體純度＞99%
? 無污染
愚公生物&百時美還確保抗體無核酸酶殘留、無內(nèi)毒素、無宿主核酸。
將抗體在37℃下存放不同時間后，再與Taq酶混合后進(jìn)行qPCR，結(jié)果均無顯著性差異。
3個批次的Taq antibody，與Taq酶孵育后檢測，封閉比例均＞99.5%，結(jié)果無顯著差異。
愚公生物&百時美可以根據(jù)客戶提供的Taq酶突變體，定制篩選最合適的抗體。
